PlantBiotech:Species/Solanum lycopersicum

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==トマト遺伝子導入実験プロトコール==
 
==トマト遺伝子導入実験プロトコール==
  
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_01.jpg
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2005.6/27改正版
 
2005.6/27改正版
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|}
  
===形質転換スケジュール===
+
<gallery perrow="2">
 
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_02.jpg|形質転換スケジュール
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_02.jpg
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_03.jpg|滅菌
 
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_04.jpg|洗浄
===滅菌===
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_05.jpg|播種
 
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_06.jpg|前培養
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_03.jpg
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_07.jpg|アグロバクテリウムの調整
 
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_08.jpg|感染
===洗浄===
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_09.jpg|除菌
 
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_10.jpg|選抜-1
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_04.jpg
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_11.jpg|選抜-2
 
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_12.jpg|馴化
===播種===
+
image:トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_13.jpg|効率
 
+
</gallery>
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_05.jpg
+
 
+
===前培養===
+
 
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_06.jpg
+
 
+
前培養;LBプレート( +抗生物質)にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリーク
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_12.jpg
+
 
+
感染用培養;シングルコロニーを LBプレート(+抗生物質)にストリーク
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+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_13.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール
+
 
+
_img_14.jpg
+
 
+
・必ず増殖中(盛り上がる前)の菌プレートを用意する
+
 
+
(導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備
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+
と良い)
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_15.jpg注)改善の余地あり
+
 
+
菌液の準備
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_16.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール
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+
_img_17.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_18.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プ
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ロトコール_img_19.jpg
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_20.jpg滅菌したキムタオルで 水分除去
+
 
+
MS液体培地 50ml+アセトシリンゴン( 10mg/L)
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_21.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール
+
 
+
_img_22.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_23.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プ
+
 
+
ロトコール_img_24.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_25.jpg
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_26.jpg注)改善の余地あり
+
 
+
洗浄 MS液体培地除菌 MS液体培地+Cb 500mg/l
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_27.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール
+
 
+
_img_28.jpg
+
 
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2週間,25℃16h日長
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傷をつけないように気をつける
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_29.jpg
+
 
+
カルス誘導培地 MS+2mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_30.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール
+
 
+
_img_31.jpg
+
 
+
サージカルテープでシール(選抜 1)パラフィルムでシール(選抜 2) 24切片/1シャーレ子葉は表
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+
面を上に・少し培地に埋め込む
+
 
+
選抜3回目(再分化誘導)
+
 
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再分化誘導培地 MS+1mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
+
 
+
パラフィルムでシール 1シャーレあたり 20切片以下 3回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り
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+
落とす
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_32.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール
+
 
+
_img_33.jpgimages/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_34.jpg
+
 
+
シュート伸長、発根誘導培地 MS+1mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
+
 
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カルス化した切片をマヨネーズ瓶に移す
+
 
+
選抜5回目(発根)
+
 
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発根誘導培地 MS+0.5mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
+
 
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_35.jpg
+
 
+
シュートの条件:発根したカルスから取る・大きさ( 2cm程度)発根を阻害されるのでカルスはきれ
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いに取り除くアグロとエスケープを防ぐため、少なくとも 3回は頂芽を植継ぐ花芽は切り落とす !!
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_36.jpg
+
 
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; ・
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: 根を傷つけない
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; ・
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: ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い、 1週間程度かけてサランラップをあ
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けて湿度を下げていく。
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: images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_37.jpg・土でも馴化できるが、湿度には十分注意
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する。
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; ・水やりは最初の
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: 2週間は水のみ、その後 1000倍ハイポネックッス /週1
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_38.jpg
+
 
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h1. 植物形質転換用バイナリーベクター
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Liu et al. _Proc. Natl. Acad. Sci. USA. _96, 6535–6540, (1999)
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_39.jpg*(*平均インサート長: *80Kb)*
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1ベクターあたり感染:240切片馴化できた系統数: 0~21系統作出
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カルベニシリンよりMeropenemの方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もあります !!
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*Yoichi Ogawa · Masahiro Mii *(2004) _Arch Microbiol _181 : 331.336
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_40.jpg
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Screening for highly active ˟-lactam antibiotics against _Agrobacterium tumefaciens _
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Revision as of 11:59, 4 July 2011

トマト遺伝子導入実験プロトコール

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2005.6/27改正版

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