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− | <IMG width=889 height=587 style="display:block; float:none" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_0.jpg">
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_0.jpg |
− | <P>
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'serif', 'Times New Roman PSMT', serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >2005.6/27</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >改正版</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=913 height=605 style="display:block; float:none; margin-bottom:58px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_1.jpg">
| + | |
− | <P style="text-align:center">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >以降</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >2</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >週間おきに選</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抜
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=903 height=719 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_2.jpg">
| + | |
− | <IMG width=939 height=699 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_3.jpg">
| + | |
− | <IMG width=941 height=704 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_4.jpg">
| + | |
− | <IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_5.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:30px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >本葉が出たもの</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >は </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >N</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >G
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=531 height=127 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:86px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_6.jpg">
| + | |
− | <IMG width=303 height=289 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:29px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_7.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:89px; margin-right:23px; margin-left:505px; text-indent:-504px; line-height:42px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >作業中乾かないように注意</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >!</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >! </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >子葉は必ず背軸面が培地に触れるように置床</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="text-align:center; margin-bottom:-19px; margin-left:315px; line-height:45px">
| + | |
− | <IMG width=303 height=317 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:-19px; margin-left:315px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_8.jpg">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >湿らし</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >た
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >ろ紙</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >へ
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=61 height=20 style="display:block; float:none; margin-bottom:18px; margin-right:398px; margin-left:480px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_9.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:11px; margin-left:28px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:18pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >1cm</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:73px; margin-left:315px; line-height:45px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >一時置き</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=124 height=55 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:4px; margin-right:814px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_10.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:15px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >作業は湿らせたろ紙の上で</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | ><Sub>MS+2mg/l Zeatin+3% Suc+0.8% Agar </Sub></SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-right:30px; line-height:35px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | ><Sup>子葉を傷つけないように</Sup></SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >48</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >切片</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >/1</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >シャーレ</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >( </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >9cm</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >深底シャーレ)</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | ><Sup>胚軸は下の方を使う</Sup></SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >パラフィルムでシー</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >ル </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | ><Sup>子葉の両端を切<SPAN style=" font-weight:normal"
| + | |
− | >る </SPAN
| + | |
− | ></Sup></SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >2</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >日</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >間 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >25</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >℃</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >,16h</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >日長で培</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >養 </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=547 height=80 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:48px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_11.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:30px; line-height:45px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >前培養;</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >LB</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >プレート</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >( </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抗生物質)にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリー</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >ク </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=289 height=59 style="display:block; float:none; text-align:right" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_12.jpg">
| + | |
− | <P style="text-align:justify; margin-bottom:22px; line-height:45px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >感染用培養;シングルコロニー</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >を </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >LB</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >プレート(</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抗生物質)にストリーク</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=289 height=57 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:5px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_13.jpg">
| + | |
− | <IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:0px; margin-right:705px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_14.jpg">
| + | |
− | <P style="text-align:justify">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >・</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >必ず増殖中(盛り上がる前)の菌プレートを用意す</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >る
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="text-align:justify; margin-right:37px; margin-left:43px; text-indent:-20px; line-height:38px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >(導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備と良い</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >) </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="text-align:center; margin-bottom:30px; line-height:32px">
| + | |
− | <IMG width=121 height=79 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:30px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_15.jpg">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#FF0063"
| + | |
− | >注)改善の余地あり</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:143px; margin-left:40px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >菌液の準備</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=53 height=20 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:157px; margin-right:255px; margin-left:629px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_16.jpg">
| + | |
− | <IMG width=100 height=56 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:157px; margin-right:625px; margin-left:212px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_17.jpg">
| + | |
− | <IMG width=444 height=320 style="display:block; float:none; margin-bottom:157px; margin-right:245px; margin-left:249px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_18.jpg">
| + | |
− | <IMG width=220 height=207 style="display:block; float:none; margin-bottom:157px; margin-right:357px; margin-left:361px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_19.jpg">
| + | |
− | <P style="text-align:center; margin-bottom:-5px; margin-left:77px; line-height:32px">
| + | |
− | <IMG width=68 height=151 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:-5px; margin-left:77px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_20.jpg">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >滅菌したキムタオル</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >で
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >水分除</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >去
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:160px; margin-right:620px; line-height:32px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >MS</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >液体培</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >地 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >50ml</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+アセトシリンゴン</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >( </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >10mg/L)</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=220 height=209 style="display:block; float:none; margin-bottom:157px; margin-right:349px; margin-left:369px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_21.jpg">
| + | |
− | <IMG width=21 height=49 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:157px; margin-right:122px; margin-left:794px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_22.jpg">
| + | |
− | <IMG width=151 height=312 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:157px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_23.jpg">
| + | |
− | <IMG width=189 height=216 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:115px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_24.jpg">
| + | |
− | <IMG width=940 height=220 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_25.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:54px; margin-left:394px; line-height:32px">
| + | |
− | <IMG width=121 height=80 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:54px; margin-left:394px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_26.jpg">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#FF0063"
| + | |
− | >注)改善の余地あり</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:37px; margin-right:526px; line-height:32px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >洗</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >浄 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >MS</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >液体培地除</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >菌 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >MS</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >液体培地</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+Cb 500mg/l </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=571 height=403 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:25px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_27.jpg">
| + | |
− | <IMG width=191 height=57 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:13px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_28.jpg">
| + | |
− | <P>
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >2</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >週間</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >,25</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >℃</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >16h</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >日長</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-left:102px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >傷をつけないように気をつけ</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >る
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=524 height=157 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_29.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:22px; line-height:31px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >カルス誘導培</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >地 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >MS+2mg/l Zeatin+</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抗生物質</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=205 height=195 style="display:block; float:none; text-align:left" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_30.jpg">
| + | |
− | <IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_31.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:30px; line-height:33px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >サージカルテープでシール(選</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抜 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >1</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >)パラフィルムでシール(選</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抜 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >2</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >) </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >24</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >切片</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >/1</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >シャーレ子葉は表面を上に・少し培地に埋め込む</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="text-align:center; margin-bottom:15px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >選抜</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >3</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >回目(再分化誘導</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >)
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:26px; line-height:31px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >再分化誘導培</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >地 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >MS+1mg/l Zeatin+</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抗生物質</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:11px; margin-left:66px; line-height:31px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >パラフィルムでシー</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >ル </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >1</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >シャーレあた</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >り </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >20</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >切片以</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >下 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >3</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り落と</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >す </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:0px; margin-right:180px; margin-left:420px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_32.jpg">
| + | |
− | <IMG width=197 height=571 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:14px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_33.jpg">
| + | |
− | <IMG width=568 height=157 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_34.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-bottom:37px; line-height:31px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >シュート伸長、発根誘導培</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >地 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >MS+1mg/l IBA+</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抗生物質</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:37px; margin-left:8px; line-height:31px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >カルス化した切片をマヨネーズ瓶に移す</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="text-align:center; margin-bottom:15px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >選抜</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >5</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >回目(発根</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >)
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:47px; margin-left:8px; line-height:31px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >発根誘導培</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >地 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >MS+0.5mg/l IBA+</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >抗生物質</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar</SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=124 height=49 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:-4px; margin-right:572px; margin-left:28px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_35.jpg">
| + | |
− | <P style="margin-right:77px; line-height:30px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >シュートの条件:発根したカルスから取る・大きさ</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >( </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >2cm</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >程度)発根を阻害されるのでカルスはきれいに取り除くアグロとエスケープを防ぐため、少なくと</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >も </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >3</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >回は頂芽を植継ぐ花芽は切り落と</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >す </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >!! </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=775 height=480 style="display:block; float:none; margin-bottom:34px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_36.jpg">
| + | |
− | <dl>
| + | |
− | <DT>
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >・</SPAN
| + | |
− | ></DT>
| + | |
− | <DD>
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >根を傷つけない</SPAN
| + | |
− | ></DD>
| + | |
| | | |
− | <DT style="margin-bottom:3px">
| + | 2005.6/27改正版 |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >・</SPAN
| + | |
− | ></DT>
| + | |
− | <DD style="margin-bottom:3px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >、
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >1</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >週間程度かけてサランラップをあけて湿度を下げていく</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >。
| + | |
− | </SPAN
| + | |
− | ></DD>
| + | |
| | | |
− | <DD>
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_1.jpg |
− | <IMG width=123 height=56 style="vertical-align:text-bottom; text-align:left; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_37.jpg">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >・土でも馴化できるが、湿度には十分注意する。</SPAN
| + | |
− | ></DD>
| + | |
| | | |
− | <DT>
| + | 以降2週間おきに選抜 |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >・水やりは最初の</SPAN
| + | |
− | ></DT>
| + | |
− | <DD>
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >2</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >週間は水のみ、その</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >後 </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >1000</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >倍ハイポネックッ</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >ス </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >/</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >週</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >1 </SPAN
| + | |
− | ></DD>
| + | |
| | | |
− | </dl>
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_2.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_3.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_4.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_5.jpg |
− | <IMG width=121 height=80 style="display:block; float:none; margin-bottom:32px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_38.jpg">
| + | |
− | <DIV class="Part"
| + | 本葉が出たものは NG |
− | ><H1>
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'HGP Gothic', sans-serif; font-size:31.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_6.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_7.jpg |
− | >植物形質転換用バイナリーベクタ</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'HGP Gothic', sans-serif; font-size:31.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | 作業中乾かないように注意!! 子葉は必ず背軸面が培地に触れるように置床 |
− | >ー </SPAN
| + | |
− | ></H1>
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_8.jpg 湿らした ろ紙へ |
− | <P style="text-align:; margin-bottom:37px; margin-right:37px; margin-left:45px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_9.jpg |
− | >Liu et al. </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-style:italic; font-weight:normal; color:#000000"
| + | 1cm |
− | >Proc. Natl. Acad. Sci. USA. </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | 一時置き |
− | >96, 6535?6540, (1999) </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_10.jpg |
− | <P style="text-align:; margin-bottom:77px; margin-left:389px">
| + | |
− | <IMG width=359 height=92 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:77px; margin-left:389px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_39.jpg">
| + | 作業は湿らせたろ紙の上で~MS+2mg/l Zeatin+3% Suc+0.8% Agar ~ |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:bold; color:#000000"
| + | |
− | >(</SPAN
| + | ^子葉を傷つけないように^48切片/1シャーレ( 9cm深底シャーレ)^胚軸は下の方を使う^パラフィルムでシール ^子葉の両端を切る ^2日間 25℃,16h日長で培養 |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >平均インサート長</SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_11.jpg |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >: </SPAN
| + | 前培養;LBプレート( +抗生物質)にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリーク |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:bold; color:#000000"
| + | |
− | >80Kb)</SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_12.jpg |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:89px; line-height:38px">
| + | 感染用培養;シングルコロニーを LBプレート(+抗生物質)にストリーク |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >1</SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_13.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_14.jpg |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >ベクターあたり感染:</SPAN
| + | ・必ず増殖中(盛り上がる前)の菌プレートを用意する |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >240</SPAN
| + | (導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備と良い) |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >切片馴化できた系統数</SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_15.jpg |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >: </SPAN
| + | 注)改善の余地あり |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >0</SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_16.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_17.jpg |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >~</SPAN
| + | 滅菌したキムタオルで 水分除去 |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >21</SPAN
| + | MS液体培地 50ml+アセトシリンゴン( 10mg/L) |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >系統作出</SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_18.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_19.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_20.jpg |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-right:191px; margin-left:156px; text-indent:-155px; line-height:26px">
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_21.jpg 注)改善の余地あり |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >カルベニシリンより</SPAN
| + | 洗浄 MS液体培地除菌 MS液体培地+Cb 500mg/l |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >Meropenem</SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_22.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_23.jpg |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >の方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もありま</SPAN
| + | 2週間,25℃16h日長 |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >す </SPAN
| + | 傷をつけないように気をつける |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >!! </SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_24.jpg |
− | ></P>
| + | |
− | <P style="margin-bottom:26px; line-height:26px">
| + | カルス誘導培地 MS+2mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:bold; color:#000000"
| + | |
− | >Yoichi Ogawa ・ Masahiro Mii </SPAN
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_25.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_26.jpg |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >(2004) </SPAN
| + | サージカルテープでシール(選抜 1)パラフィルムでシール(選抜 2) 24切片/1シャーレ子葉は表面を上に・少し培地に埋め込む |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-style:italic; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >Arch Microbiol </SPAN
| + | 選抜3回目(再分化誘導) |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | |
− | >181 : 331.336 </SPAN
| + | 再分化誘導培地 MS+1mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar |
− | ></P>
| + | |
− | <IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:13px; margin-left:721px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_40.jpg">
| + | パラフィルムでシール 1シャーレあたり 20切片以下 3回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り落とす |
− | <P style="text-indent:156px; line-height:26px">
| + | |
− | <SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_27.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_28.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_29.jpg |
− | >Screening for highly active </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial Unicode MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | シュート伸長、発根誘導培地 MS+1mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar |
− | >?</SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
| + | カルス化した切片をマヨネーズ瓶に移す |
− | >-lactam antibiotics against </SPAN
| + | |
− | ><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-style:italic; font-weight:normal; color:#000000"
| + | 選抜5回目(発根) |
− | >Agrobacterium tumefaciens </SPAN
| + | |
− | ></P>
| + | 発根誘導培地 MS+0.5mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar |
− | </DIV>
| + | |
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_30.jpg |
| + | |
| + | シュートの条件:発根したカルスから取る・大きさ( 2cm程度)発根を阻害されるのでカルスはきれいに取り除くアグロとエスケープを防ぐため、少なくとも 3回は頂芽を植継ぐ花芽は切り落とす !! |
| + | |
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_31.jpg |
| + | |
| + | ; ・ |
| + | : 根を傷つけない |
| + | ; ・ |
| + | : ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い、 1週間程度かけてサランラップをあけて湿度を下げていく。 |
| + | : images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_32.jpg ・土でも馴化できるが、湿度には十分注意する。 |
| + | ; ・水やりは最初の |
| + | : 2週間は水のみ、その後 1000倍ハイポネックッス /週1 |
| + | |
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_33.jpg |
| + | |
| + | h1. 植物形質転換用バイナリーベクター |
| + | |
| + | Liu et al. _Proc. Natl. Acad. Sci. USA. _96, 6535?6540, (1999) |
| + | |
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_34.jpg *(*平均インサート長: *80Kb)* |
| + | |
| + | 1ベクターあたり感染:240切片馴化できた系統数: 0~21系統作出 |
| + | |
| + | カルベニシリンよりMeropenemの方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もあります !! |
| + | |
| + | *Yoichi Ogawa ・ Masahiro Mii *(2004) _Arch Microbiol _181 : 331.336 |
| + | |
| + | images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_35.jpg |
| + | |
| + | Screening for highly active ?-lactam antibiotics against _Agrobacterium tumefaciens _ |
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_2.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_3.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_4.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_5.jpg
^子葉を傷つけないように^48切片/1シャーレ( 9cm深底シャーレ)^胚軸は下の方を使う^パラフィルムでシール ^子葉の両端を切る ^2日間 25℃,16h日長で培養
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_18.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_19.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_20.jpg
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_27.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_28.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_29.jpg
シュートの条件:発根したカルスから取る・大きさ( 2cm程度)発根を阻害されるのでカルスはきれいに取り除くアグロとエスケープを防ぐため、少なくとも 3回は頂芽を植継ぐ花芽は切り落とす !!
h1. 植物形質転換用バイナリーベクター
Liu et al. _Proc. Natl. Acad. Sci. USA. _96, 6535?6540, (1999)
Screening for highly active ?-lactam antibiotics against _Agrobacterium tumefaciens _