PlantBiotech:Species/Solanum lycopersicum
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==トマト遺伝子導入実験プロトコール== | ==トマト遺伝子導入実験プロトコール== | ||
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[edit] トマト遺伝子導入実験プロトコール
2005. 6/27 改正版 |
[edit] 形質転換スケジュール
[edit] 実験プロトコール
[edit] 滅菌
[edit] 洗浄
クリーンベンチ作業
- point
- 種子の沈殿が洗浄の目安。洗浄が甘いと発芽が悪くなる。
[edit] 播種
クリーンベンチ作業
[edit] 前培養
クリーンベンチ作業
→湿らしたろ紙へ一時置き→ |
- point
- 本葉が出たものはNG。
- 作業中乾かないように注意!!
- 子葉は必ず背軸面が培地に触れるように置床。
[edit] アグロバクテリウムの調整
- 前培養;
- LBプレート(+抗生物質)にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリーク
- ↓2 日間 28 ℃,暗所
- 感染用培養;
- シングルコロニーをLBプレート(+抗生物質)にストリーク
- ↓2 日間 28 ℃,暗所
- point
- 必ず増殖中(盛り上がる前)の菌プレートを用意する。
- 導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備と良い。
[edit] 感染
- 注)改善の余地あり
[edit] 除菌
- 注)改善の余地あり
- 洗浄:MS液体培地
- 除菌:MS液体培地+Cb 500 mg/l
- point
- 傷をつけないように気をつける。
[edit] 選抜
[edit] 馴化
→ |
- point
- 根を傷つけない
- ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い、 1 週間程度かけてサランラップをあけて湿度を下げていく。
- 土でも馴化できるが、湿度には十分注意する。
- 水やりは最初の 2 週間は水のみ、その後 1000 倍ハイポネックッス/週 1。
[edit] 効率
- 植物形質転換用バイナリーベクター
- Liu et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA.; 96: 6535-6540
|
- point
- カルベニシリンよりMeropenemの方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もあります!!
- Yoichi Ogawa, Masahiro Mii (2004) Arch Microbiol; 181: 331-336
- Screening for highly active β-lactam antibiotics against Agrobacterium tumefaciens