PlantBiotech:Species/Solanum lycopersicum

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<IMG width=889 height=587 style="display:block; float:none" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_0.jpg">
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_0.jpg
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<P>
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<SPAN style="font-family:'serif', 'Times New Roman PSMT', serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>2005.6/27</SPAN
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>改正版</SPAN
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<P style="text-align:center">
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<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>以降</SPAN
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><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>2</SPAN
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>週間おきに選</SPAN
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>抜
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</SPAN
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></P>
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<P style="margin-bottom:30px">
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<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>本葉が出たもの</SPAN
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>は </SPAN
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><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>N</SPAN
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>G
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</SPAN
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></P>
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<P style="margin-bottom:89px; margin-right:23px; margin-left:505px; text-indent:-504px; line-height:42px">
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<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>作業中乾かないように注意</SPAN
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><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>!</SPAN
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><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>! </SPAN
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><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>子葉は必ず背軸面が培地に触れるように置床</SPAN
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></P>
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<P style="text-align:center; margin-bottom:-19px; margin-left:315px; line-height:45px">
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<IMG width=303 height=317 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:-19px; margin-left:315px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_8.jpg">
+
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<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
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>湿らし</SPAN
+
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><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>た
+
−
</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>ろ紙</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>へ
+
−
</SPAN
+
−
></P>
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<IMG width=61 height=20 style="display:block; float:none; margin-bottom:18px; margin-right:398px; margin-left:480px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_9.jpg">
+
−
<P style="margin-bottom:11px; margin-left:28px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:18pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>1cm</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:73px; margin-left:315px; line-height:45px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
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>一時置き</SPAN
+
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></P>
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<IMG width=124 height=55 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:4px; margin-right:814px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_10.jpg">
+
−
<P style="margin-bottom:15px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>作業は湿らせたろ紙の上で</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
><Sub>MS+2mg/l Zeatin+3% Suc+0.8% Agar </Sub></SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-right:30px; line-height:35px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
><Sup>子葉を傷つけないように</Sup></SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>48</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>切片</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>/1</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>シャーレ</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>（ </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>9cm</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>深底シャーレ）</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
><Sup>胚軸は下の方を使う</Sup></SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>パラフィルムでシー</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>ル </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
><Sup>子葉の両端を切<SPAN style=" font-weight:normal"
+
−
>る </SPAN
+
−
></Sup></SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>2</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>日</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>間 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>25</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>℃</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>,16h</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>日長で培</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:22pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>養 </SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=547 height=80 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:48px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_11.jpg">
+
−
<P style="margin-bottom:30px; line-height:45px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>前培養；</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>LB</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>プレート</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>（ </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>+</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抗生物質）にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリー</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>ク </SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=289 height=59 style="display:block; float:none; text-align:right" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_12.jpg">
+
−
<P style="text-align:justify; margin-bottom:22px; line-height:45px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>感染用培養；シングルコロニー</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>を </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>LB</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>プレート（</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>+</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抗生物質）にストリーク</SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=289 height=57 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:5px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_13.jpg">
+
−
<IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:0px; margin-right:705px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_14.jpg">
+
−
<P style="text-align:justify">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>・</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>必ず増殖中（盛り上がる前）の菌プレートを用意す</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>る
+
−
</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="text-align:justify; margin-right:37px; margin-left:43px; text-indent:-20px; line-height:38px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>（導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備と良い</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>） </SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="text-align:center; margin-bottom:30px; line-height:32px">
+
−
<IMG width=121 height=79 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:30px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_15.jpg">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#FF0063"
+
−
>注）改善の余地あり</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:143px; margin-left:40px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>菌液の準備</SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=53 height=20 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:157px; margin-right:255px; margin-left:629px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_16.jpg">
+
−
<IMG width=100 height=56 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:157px; margin-right:625px; margin-left:212px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_17.jpg">
+
−
<IMG width=444 height=320 style="display:block; float:none; margin-bottom:157px; margin-right:245px; margin-left:249px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_18.jpg">
+
−
<IMG width=220 height=207 style="display:block; float:none; margin-bottom:157px; margin-right:357px; margin-left:361px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_19.jpg">
+
−
<P style="text-align:center; margin-bottom:-5px; margin-left:77px; line-height:32px">
+
−
<IMG width=68 height=151 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:-5px; margin-left:77px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_20.jpg">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>滅菌したキムタオル</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>で
+
−
</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>水分除</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>去
+
−
</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:160px; margin-right:620px; line-height:32px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>MS</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>液体培</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>地 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>50ml</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>＋アセトシリンゴン</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>（ </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>10mg/L)</SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=220 height=209 style="display:block; float:none; margin-bottom:157px; margin-right:349px; margin-left:369px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_21.jpg">
+
−
<IMG width=21 height=49 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:157px; margin-right:122px; margin-left:794px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_22.jpg">
+
−
<IMG width=151 height=312 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:157px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_23.jpg">
+
−
<IMG width=189 height=216 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:115px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_24.jpg">
+
−
<IMG width=940 height=220 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_25.jpg">
+
−
<P style="margin-bottom:54px; margin-left:394px; line-height:32px">
+
−
<IMG width=121 height=80 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:54px; margin-left:394px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_26.jpg">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#FF0063"
+
−
>注）改善の余地あり</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:37px; margin-right:526px; line-height:32px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>洗</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>浄 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>MS</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>液体培地除</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>菌 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>MS</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>液体培地</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>+Cb 500mg/l </SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=571 height=403 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:25px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_27.jpg">
+
−
<IMG width=191 height=57 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:13px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_28.jpg">
+
−
<P>
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>2</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>週間</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>,25</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>℃</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>16h</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>日長</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-left:102px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>傷をつけないように気をつけ</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>る
+
−
</SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=524 height=157 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_29.jpg">
+
−
<P style="margin-bottom:22px; line-height:31px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>カルス誘導培</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>地 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>MS+2mg/l Zeatin+</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抗生物質</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar</SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=205 height=195 style="display:block; float:none; text-align:left" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_30.jpg">
+
−
<IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_31.jpg">
+
−
<P style="margin-bottom:30px; line-height:33px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>サージカルテープでシール（選</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抜 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>1</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>）パラフィルムでシール（選</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抜 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>2</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>） </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>24</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>切片</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>/1</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>シャーレ子葉は表面を上に・少し培地に埋め込む</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="text-align:center; margin-bottom:15px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>選抜</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>3</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>回目（再分化誘導</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>）
+
−
</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:26px; line-height:31px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>再分化誘導培</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>地 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>MS+1mg/l Zeatin+</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抗生物質</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar </SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:11px; margin-left:66px; line-height:31px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>パラフィルムでシー</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>ル </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>1</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>シャーレあた</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>り </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>20</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>切片以</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>下 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>3</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り落と</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>す </SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:0px; margin-right:180px; margin-left:420px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_32.jpg">
+
−
<IMG width=197 height=571 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:14px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_33.jpg">
+
−
<IMG width=568 height=157 style="display:block; float:none; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_34.jpg">
+
−
<P style="margin-bottom:37px; line-height:31px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>シュート伸長、発根誘導培</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>地 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>MS+1mg/l IBA+</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抗生物質</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:37px; margin-left:8px; line-height:31px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>カルス化した切片をマヨネーズ瓶に移す</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="text-align:center; margin-bottom:15px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>選抜</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>5</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>回目（発根</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>）
+
−
</SPAN
+
−
></P>
+
−
<P style="margin-bottom:47px; margin-left:8px; line-height:31px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>発根誘導培</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>地 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>MS+0.5mg/l IBA+</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>抗生物質</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar</SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=124 height=49 style="display:block; float:none; text-align:left; margin-bottom:-4px; margin-right:572px; margin-left:28px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_35.jpg">
+
−
<P style="margin-right:77px; line-height:30px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>シュートの条件：発根したカルスから取る・大きさ</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>（ </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>2cm</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>程度）発根を阻害されるのでカルスはきれいに取り除くアグロとエスケープを防ぐため、少なくと</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>も </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>3</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>回は頂芽を植継ぐ花芽は切り落と</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>す </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>!! </SPAN
+
−
></P>
+
−
<IMG width=775 height=480 style="display:block; float:none; margin-bottom:34px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_36.jpg">
+
−
<dl>
+
−
<DT>
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>・</SPAN
+
−
></DT>
+
−
<DD>
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>根を傷つけない</SPAN
+
−
></DD>
+
  
−
<DT style="margin-bottom:3px">
+
2005.6/27改正版
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>・</SPAN
+
−
></DT>
+
−
<DD style="margin-bottom:3px">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>、
+
−
</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>1</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>週間程度かけてサランラップをあけて湿度を下げていく</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>。
+
−
</SPAN
+
−
></DD>
+
  
−
<DD>
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_1.jpg
−
<IMG width=123 height=56 style="vertical-align:text-bottom; text-align:left; margin-bottom:0px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_37.jpg">
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>・土でも馴化できるが、湿度には十分注意する。</SPAN
+
−
></DD>
+
  
−
<DT>
+
以降2週間おきに選抜
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>・水やりは最初の</SPAN
+
−
></DT>
+
−
<DD>
+
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>2</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>週間は水のみ、その</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>後 </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>1000</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>倍ハイポネックッ</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>ス </SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>/</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>週</SPAN
+
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
−
>1 </SPAN
+
−
></DD>
+
  
−
</dl>
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_2.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_3.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_4.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_5.jpg
−
<IMG width=121 height=80 style="display:block; float:none; margin-bottom:32px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_38.jpg">
+
 
−
<DIV class="Part"
+
本葉が出たものは NG
−
><H1>
+
 
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'HGP Gothic', sans-serif; font-size:31.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_6.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_7.jpg
−
>植物形質転換用バイナリーベクタ</SPAN
+
 
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'HGP Gothic', sans-serif; font-size:31.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
作業中乾かないように注意!! 子葉は必ず背軸面が培地に触れるように置床
−
>ー </SPAN
+
 
−
></H1>
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_8.jpg 湿らした ろ紙へ
−
<P style="text-align:; margin-bottom:37px; margin-right:37px; margin-left:45px">
+
 
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_9.jpg
−
>Liu et al. </SPAN
+
 
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-style:italic; font-weight:normal; color:#000000"
+
1cm
−
>Proc. Natl. Acad. Sci. USA. </SPAN
+
 
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:19.9pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
一時置き
−
>96, 6535?6540, (1999) </SPAN
+
 
−
></P>
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_10.jpg
−
<P style="text-align:; margin-bottom:77px; margin-left:389px">
+
 
−
<IMG width=359 height=92 style="display:block; float:left; text-align:left; margin-bottom:77px; margin-left:389px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_39.jpg">
+
作業は湿らせたろ紙の上で~MS+2mg/l Zeatin+3% Suc+0.8% Agar ~
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:bold; color:#000000"
+
 
−
>(</SPAN
+
^子葉を傷つけないように^48切片/1シャーレ（ 9cm深底シャーレ）^胚軸は下の方を使う^パラフィルムでシール ^子葉の両端を切る ^2日間 25℃,16h日長で培養
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>平均インサート長</SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_11.jpg
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>： </SPAN
+
前培養；LBプレート（ +抗生物質）にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリーク
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:28pt; font-weight:bold; color:#000000"
+
 
−
>80Kb)</SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_12.jpg
−
></P>
+
 
−
<P style="margin-bottom:89px; line-height:38px">
+
感染用培養；シングルコロニーを LBプレート（+抗生物質）にストリーク
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>1</SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_13.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_14.jpg
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>ベクターあたり感染：</SPAN
+
・必ず増殖中（盛り上がる前）の菌プレートを用意する
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>240</SPAN
+
（導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備と良い）
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>切片馴化できた系統数</SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_15.jpg
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>： </SPAN
+
注）改善の余地あり
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>0</SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_16.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_17.jpg
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>～</SPAN
+
滅菌したキムタオルで 水分除去
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>21</SPAN
+
MS液体培地 50ml＋アセトシリンゴン（ 10mg/L)
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:24pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>系統作出</SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_18.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_19.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_20.jpg
−
></P>
+
 
−
<P style="margin-right:191px; margin-left:156px; text-indent:-155px; line-height:26px">
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_21.jpg 注）改善の余地あり
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>カルベニシリンより</SPAN
+
洗浄 MS液体培地除菌 MS液体培地+Cb 500mg/l
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>Meropenem</SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_22.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_23.jpg
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>の方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もありま</SPAN
+
2週間,25℃16h日長
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>す </SPAN
+
傷をつけないように気をつける
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>!! </SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_24.jpg
−
></P>
+
 
−
<P style="margin-bottom:26px; line-height:26px">
+
カルス誘導培地 MS+2mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:bold; color:#000000"
+
 
−
>Yoichi Ogawa ・ Masahiro Mii </SPAN
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_25.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_26.jpg
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>(2004) </SPAN
+
サージカルテープでシール（選抜 1）パラフィルムでシール（選抜 2） 24切片/1シャーレ子葉は表面を上に・少し培地に埋め込む
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-style:italic; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>Arch Microbiol </SPAN
+
選抜3回目（再分化誘導）
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
 
−
>181 : 331.336 </SPAN
+
再分化誘導培地 MS+1mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
−
></P>
+
 
−
<IMG width=124 height=56 style="display:block; float:none; text-align:right; margin-bottom:13px; margin-left:721px" src="images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_40.jpg">
+
パラフィルムでシール 1シャーレあたり 20切片以下 3回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り落とす
−
<P style="text-indent:156px; line-height:26px">
+
 
−
<SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_27.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_28.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_29.jpg
−
>Screening for highly active </SPAN
+
 
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial Unicode MS', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
シュート伸長、発根誘導培地 MS+1mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
−
>?</SPAN
+
 
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-weight:normal; color:#000000"
+
カルス化した切片をマヨネーズ瓶に移す
−
>-lactam antibiotics against </SPAN
+
 
−
><SPAN style="font-family:'sans-serif', 'Arial', sans-serif; font-size:16pt; font-style:italic; font-weight:normal; color:#000000"
+
選抜5回目（発根）
−
>Agrobacterium tumefaciens </SPAN
+
 
−
></P>
+
発根誘導培地 MS+0.5mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar
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</DIV>
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_30.jpg
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シュートの条件：発根したカルスから取る・大きさ（ 2cm程度）発根を阻害されるのでカルスはきれいに取り除くアグロとエスケープを防ぐため、少なくとも 3回は頂芽を植継ぐ花芽は切り落とす !!
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; ・
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: 根を傷つけない
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; ・
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: ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い、 1週間程度かけてサランラップをあけて湿度を下げていく。
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: images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_32.jpg ・土でも馴化できるが、湿度には十分注意する。
 +
; ・水やりは最初の
 +
: 2週間は水のみ、その後 1000倍ハイポネックッス /週1
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h1. 植物形質転換用バイナリーベクター
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Liu et al. _Proc. Natl. Acad. Sci. USA. _96, 6535?6540, (1999)
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_34.jpg *(*平均インサート長： *80Kb)*
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1ベクターあたり感染：240切片馴化できた系統数： 0～21系統作出
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カルベニシリンよりMeropenemの方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もあります !!
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*Yoichi Ogawa ・ Masahiro Mii *(2004) _Arch Microbiol _181 : 331.336
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images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_35.jpg
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Screening for highly active ?-lactam antibiotics against _Agrobacterium tumefaciens _

Revision as of 19:35, 1 July 2011

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_0.jpg

2005.6/27改正版

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_1.jpg

以降2週間おきに選抜

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_2.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_3.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_4.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_5.jpg

本葉が出たものは NG

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_6.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_7.jpg

作業中乾かないように注意!! 子葉は必ず背軸面が培地に触れるように置床

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_8.jpg 湿らした ろ紙へ

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_9.jpg

1cm

一時置き

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_10.jpg

作業は湿らせたろ紙の上で~MS+2mg/l Zeatin+3% Suc+0.8% Agar ~

^子葉を傷つけないように^48切片/1シャーレ（ 9cm深底シャーレ）^胚軸は下の方を使う^パラフィルムでシール ^子葉の両端を切る ^2日間 25℃,16h日長で培養

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_11.jpg

前培養；LBプレート（ +抗生物質）にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリーク

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_12.jpg

感染用培養；シングルコロニーを LBプレート（+抗生物質）にストリーク

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_13.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_14.jpg

・必ず増殖中（盛り上がる前）の菌プレートを用意する

（導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備と良い）

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_15.jpg

注）改善の余地あり

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_16.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_17.jpg

滅菌したキムタオルで 水分除去

MS液体培地 50ml＋アセトシリンゴン（ 10mg/L)

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_18.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_19.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_20.jpg

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_21.jpg 注）改善の余地あり

洗浄 MS液体培地除菌 MS液体培地+Cb 500mg/l

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_22.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_23.jpg

2週間,25℃16h日長

傷をつけないように気をつける

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_24.jpg

カルス誘導培地 MS+2mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_25.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_26.jpg

サージカルテープでシール（選抜 1）パラフィルムでシール（選抜 2） 24切片/1シャーレ子葉は表面を上に・少し培地に埋め込む

選抜3回目（再分化誘導）

再分化誘導培地 MS+1mg/l Zeatin+抗生物質+250mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar

パラフィルムでシール 1シャーレあたり 20切片以下 3回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り落とす

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_27.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_28.jpg images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_29.jpg

シュート伸長、発根誘導培地 MS+1mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar

カルス化した切片をマヨネーズ瓶に移す

選抜5回目（発根）

発根誘導培地 MS+0.5mg/l IBA+抗生物質+125mg/l Cb+3% Suc+0.8% Agar

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_30.jpg

シュートの条件：発根したカルスから取る・大きさ（ 2cm程度）発根を阻害されるのでカルスはきれいに取り除くアグロとエスケープを防ぐため、少なくとも 3回は頂芽を植継ぐ花芽は切り落とす !!

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_31.jpg

・
根を傷つけない
・
ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い、 1週間程度かけてサランラップをあけて湿度を下げていく。
images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_32.jpg ・土でも馴化できるが、湿度には十分注意する。
・水やりは最初の
2週間は水のみ、その後 1000倍ハイポネックッス /週1

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_33.jpg

h1. 植物形質転換用バイナリーベクター

Liu et al. _Proc. Natl. Acad. Sci. USA. _96, 6535?6540, (1999)

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_34.jpg *(*平均インサート長： *80Kb)*

1ベクターあたり感染：240切片馴化できた系統数： 0～21系統作出

カルベニシリンよりMeropenemの方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もあります !!

  • Yoichi Ogawa ・ Masahiro Mii *(2004) _Arch Microbiol _181 : 331.336

images/トマト遺伝子導入実験プロトコール_img_35.jpg

Screening for highly active ?-lactam antibiotics against _Agrobacterium tumefaciens _

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