PlantBiotech:Species/Solanum lycopersicum
From Metabolomics.JP
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: トマト播種 | : トマト播種 | ||
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|→湿らしたろ紙へ一時置き→ | |→湿らしたろ紙へ一時置き→ | ||
|[[Image:Horticulture-Solanum-lycopersicum-014.png|200px|thumb|MS+2mg/l Zeatin+3%Suc+0.8%Agar<br>48切片/1シャーレ(9cm深底シャーレ)<br>パラフィルムでシール<br>→2日間,25℃,16h日長で培養]] | |[[Image:Horticulture-Solanum-lycopersicum-014.png|200px|thumb|MS+2mg/l Zeatin+3%Suc+0.8%Agar<br>48切片/1シャーレ(9cm深底シャーレ)<br>パラフィルムでシール<br>→2日間,25℃,16h日長で培養]] | ||
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===選抜=== | ===選抜=== | ||
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; 選抜1,2回目(カルス誘導) | ; 選抜1,2回目(カルス誘導) | ||
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* 3回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り落とす。 | * 3回目の選抜ではカルスの反対側の切片を切り落とす。 | ||
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; 選抜4回目(シュート伸長・発根) | ; 選抜4回目(シュート伸長・発根) | ||
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; 選抜5回目(発根) | ; 選抜5回目(発根) | ||
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: Liu et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA.; 96: 6535-6540 | : Liu et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA.; 96: 6535-6540 | ||
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Revision as of 16:20, 8 July 2011
Contents |
トマト遺伝子導入実験プロトコール
2005.6/27改正版 |
形質転換スケジュール
|
実験プロトコール
滅菌
洗浄
クリーンベンチ作業
- point
- 種子の沈殿が洗浄の目安。洗浄が甘いと発芽が悪くなる。
播種
クリーンベンチ作業
前培養
クリーンベンチ作業
→湿らしたろ紙へ一時置き→ |
- point
- 本葉が出たものはNG。
- 作業中乾かないように注意!!
- 子葉は必ず背軸面が培地に触れるように置床。
アグロバクテリウムの調整
- 前培養;
- LBプレート(+抗生物質)にグリセロールストックのアグロバクテリウムをストリーク
- ↓2日間 28℃,暗所
- 感染用培養;
- シングルコロニーをLBプレート(+抗生物質)にストリーク
- ↓2日間 28℃,暗所
- point
- 必ず増殖中(盛り上がる前)の菌プレートを用意する。
- 導入した遺伝子によって増殖速度が微妙に異なるため、培養時間をずらしたプレートを何枚か準備と良い。
感染
- 注)改善の余地あり
除菌
- 注)改善の余地あり
- 洗浄:MS液体培地
- 除菌:MS液体培地+Cb500mg/l
- point
- 傷をつけないように気をつける。
選抜
馴化
→ |
- point
- 根を傷つけない
- ロックウールに馴化した苗を容器に入れサランラップで覆い、1週間程度かけてサランラップをあけて湿度を下げていく。
- 土でも馴化できるが、湿度には十分注意する。
- 水やりは最初の2週間は水のみ、その後1000倍ハイポネックッス/週1。
効率
- 植物形質転換用バイナリーベクター
- Liu et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA.; 96: 6535-6540
|
- 1ベクターあたり
- 感染:240切片
- 馴化できた系統数: 0-21系統作出
- point
- カルベニシリンよりMeropenemの方がアグロバクテリウムの増殖を抑えるとの報告もあります!!
- Yoichi Ogawa, Masahiro Mii (2004) Arch Microbiol; 181: 331-336
- Screening for highly active β-lactam antibiotics against Agrobacterium tumefaciens