PlantBiotech:Species/Lotus japonicus/Media - Revision history

Editor: /* Callus培地およびShoot Induction培地 */

2011-09-02T06:28:46Z

‎Callus培地およびShoot Induction培地

Editor at 06:27, 2 September 2011

2011-09-02T06:27:18Z

Editor: /* Co-cultivation培地 */

2011-09-02T06:08:29Z

‎Co-cultivation培地

Editor at 06:07, 2 September 2011

2011-09-02T06:07:56Z

Editor at 06:07, 2 September 2011

2011-09-02T06:07:19Z

Editor at 06:01, 2 September 2011

2011-09-02T06:01:39Z

Editor at 06:01, 2 September 2011

2011-09-02T06:01:29Z

Editor at 06:00, 2 September 2011

2011-09-02T06:00:02Z

Editor: /* Callus培地およびShoot Induction培地 */

2011-09-02T05:59:32Z

‎Callus培地およびShoot Induction培地

Editor at 05:55, 2 September 2011

2011-09-02T05:55:07Z

@@ Line 94: / Line 94: @@
 :1.5gのphytagelを加えてオートクレーブ。
- 熱いうちに
+:熱いうちに
 {| class="wikitable"
 |-

@@ Line 1: / Line 1: @@
 ===アグロバクテリウム用培地===
-====YEP寒天培地 <ref>LB培地でも可。</ref>====
+====YEP寒天培地====
 {| class="wikitable"
 |-

@@ Line 71: / Line 71: @@
 | 1000x Vitamin stock || 20 μl || (0.1x)
 |-
-| NAA　(1mg/ml) || 10 μl || (0.05μg/ml)
+| NAA　(1mg/ml) || 10 μl || (0.05 μg/ml)
 |-
-| BAP (1mg/ml) || 100 μl || (0.5μg/ml)
+| BAP (1mg/ml) || 100 μl || (0.5 μg/ml)
 |-
-| 1M MES (pH5.2) || 1.00 ml || (5mM)
+| 1M MES (pH5.2) || 1.00 ml || (5 mM)
 |-
-| Acetosyringone (20mg/ml) || 200 μl || (20μg/ml)
+| Acetosyringone (20mg/ml) || 200 μl || (20 μg/ml)
 |}

@@ Line 4: / Line 4: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| YE || 10g
+| YE || 10 g
 |-
-| Peptone || 10g
+| Peptone || 10 g
 |-
-| NaCl || 5g
+| NaCl || 5 g
 |}
 :を1000mlの水に溶かす。
@@ Line 18: / Line 18: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| Kanamycin || 100μg/ml
+| Kanamycin || 100 μg/ml
 |-
-| Tetracyclin || 5μg/ml
+| Tetracyclin || 5 μg/ml
 |-
-| Rifampicin || 100μg/ml
+| Rifampicin || 100 μg/ml
 |-
-| Spectinomycin || 100μg/ml
+| Spectinomycin || 100 μg/ml
 |-
-| Carbenicilin || 100μg/ml
+| Carbenicilin || 100 μg/ml
 |-
-| Gentamycin || 100μg/ml
+| Gentamycin || 100 μg/ml
 |}
 :クリーンベンチ内で、9cmプレート6-8枚に注いで固める。
@@ Line 36: / Line 36: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| Mannitol || 1.0g
+| Mannitol || 1.0 g
 |-
-| YE || 0.2g
+| YE || 0.2 g
 |-
-| MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O || 0.1g
+| MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O || 0.1 g
 |-
-| NaCl || 0.05g
+| NaCl || 0.05 g
 |}
 :を500mlの水に溶かし、100mlずつに分注してオートクレーブ、室温に保存。

@@ Line 1: / Line 1: @@
 ===アグロバクテリウム用培地===
-====YEP寒天培地====
+====YEP寒天培地 <ref>LB培地でも可。</ref>====
 <ref>LB培地でも可。</ref>
 {| class="wikitable"
 |-
@@ Line 53: / Line 52: @@
 | colspan="2" | 0.3M K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>/KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> (pH6.8)
 |-
-| K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> || 2.59g
+| K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> || 2.59 g
 |-
-| KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> || 2.05g
+| KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> || 2.05 g
 |}
 :を水にとかし100mlとする。オートクレーブ。
@@ Line 70: / Line 69: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| 1000x Vitamin stock || 20μl || (0.1x)
+| 1000x Vitamin stock || 20 μl || (0.1x)
 |-
-| NAA　(1mg/ml) || 10μl || (0.05μg/ml)
+| NAA　(1mg/ml) || 10 μl || (0.05μg/ml)
 |-
-| BAP (1mg/ml) || 100μl || (0.5μg/ml)
+| BAP (1mg/ml) || 100 μl || (0.5μg/ml)
 |-
-| 1M MES (pH5.2) || 1.00ml || (5mM)
+| 1M MES (pH5.2) || 1.00 ml || (5mM)
 |-
-| Acetosyringone (20mg/ml) || 200μl || (20μg/ml)
+| Acetosyringone (20mg/ml) || 200 μl || (20μg/ml)
 |}
@@ Line 85: / Line 84: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| B5 basal salts || 1.66g
+| B5 basal salts || 1.66 g
 |-
-| sucrose || 10g
+| sucrose || 10 g
 |}
 :を500mlの水に溶かす。
@@ Line 96: / Line 95: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| 4M (NH4)2SO4 || 625μl || (10mM NH<sub>4</sub><sup>+</sup>)
+| 4M (NH4)2SO4 || 625 μl || (10mM NH<sub>4</sub><sup>+</sup>)
 |}
 :を加える。
@@ Line 103: / Line 102: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| 1000x Vitamin stock || 500μl || (1x)
+| 1000x Vitamin stock || 500 μl || (1x)
 |-
-| NAA　(1mg/ml) || 25μl || (0.05μg/ml)
+| NAA　(1mg/ml) || 25 μl || (0.05μg/ml)
 |-
-| BAP (1mg/ml) || 250μl || (0.5μg/ml) <ref>GifuではBAP濃度1.0μg/mlの方がよい場合がある。しかし、MG20はBAPに弱いので、カルス培地、再分化培地ともに、0.2μg/mlがよい。</ref>
+| BAP (1mg/ml) || 250 μl || (0.5μg/ml) <ref>GifuではBAP濃度1.0μg/mlの方がよい場合がある。しかし、MG20はBAPに弱いので、カルス培地、再分化培地ともに、0.2μg/mlがよい。</ref>
 |-
-| cefotaxime (30mg/ml) || 5ml || (300μg/ml)
+| cefotaxime (30mg/ml) || 5 ml || (300μg/ml)
 |}
@@ Line 115: / Line 114: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| G418 (50mg/ml) || 100-200μl/500ml || (10-20μg/ml)
+| G418 (50mg/ml) || 100-200 μl/500ml || (10-20μg/ml)
 |-
-| HygromycinB (10mg/ml) || 0.75-2ml/500ml || (15-40μg/ml)
+| HygromycinB (10mg/ml) || 0.75-2 ml/500ml || (15-40μg/ml)
 |}
 ====Shoot Elongation培地====
-(1x B5, 2% sucrose, BAP 0.2μg/ml, 0.3% phytagel)
+(1x B5, 2% sucrose, BAP 0.2 μg/ml, 0.3 % phytagel)
 {| class="wikitable"
 |-
-| B5 basal salts || 1.66g
+| B5 basal salts || 1.66 g
 |-
-| sucrose || 10g
+| sucrose || 10 g
 |}
 :を500mlの水に溶かす。
@@ Line 135: / Line 134: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| 1000x Vitamin stock || 500μl || (1x)
+| 1000x Vitamin stock || 500 μl || (1x)
 |-
-| BAP stock (1mg/ml) || 100μl || (0.2μg/ml)
+| BAP stock (1mg/ml) || 100 μl || (0.2μg/ml)
 |-
-| cefotaxime (30mg/ml) || 2.5ml || (150μg/ml)
+| cefotaxime (30mg/ml) || 2.5 ml || (150μg/ml)
 |}
@@ Line 147: / Line 146: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| B5 basal salts || 0.83g
+| B5 basal salts || 0.83 g
 |-
-| sucrose || 5g
+| sucrose || 5 g
 |}
 :を500 mlの水に溶かす。
@@ Line 158: / Line 157: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| 1000x Vitamin stock || 250μl || (0.5x)
+| 1000x Vitamin stock || 250 μl || (0.5x)
 |-
-| NAA stock (1mg/ml) || 250μl || (0.5μg/ml)
+| NAA stock (1mg/ml) || 250 μl || (0.5μg/ml)
 |}
@@ Line 168: / Line 167: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| B5 basal salts || 0.83g
+| B5 basal salts || 0.83 g
 |-
-| sucrose || 5g
+| sucrose || 5 g
 |}
 :を500 mlの水に溶かす。
@@ Line 179: / Line 178: @@
 {| class="wikitable"
 |-
-| 1000x Vitamin stock || 250μl || (0.5x)
+| 1000x Vitamin stock || 250 μl || (0.5x)
 |}

@@ Line 111: / Line 111: @@
 |}
-Selection <ref>Selectionのための最適な抗生物質濃度は、実験的に決める。特にHygromycinは純度が低く一定しないのでロットごとにkill-curveを作って確認する必要がある。Shoot inductionでのselectionはオプションである。カルス培地で5週以上のselectionが行われていれば、shoot inductionは抗生物質なしでよい。あるいは最初の2週だけselectionを続けてもよい（Stiller et al., 1997）。抗生物質の存在は、多かれ少なかれ再分化を遅らせ,再生効率を低下させる。</ref>
+:Selection <ref>Selectionのための最適な抗生物質濃度は、実験的に決める。特にHygromycinは純度が低く一定しないのでロットごとにkill-curveを作って確認する必要がある。Shoot inductionでのselectionはオプションである。カルス培地で5週以上のselectionが行われていれば、shoot inductionは抗生物質なしでよい。あるいは最初の2週だけselectionを続けてもよい（Stiller et al., 1997）。抗生物質の存在は、多かれ少なかれ再分化を遅らせ,再生効率を低下させる。</ref>
 {| class="wikitable"
 |-

@@ Line 185: / Line 185: @@
 <references/>
-;Kill-curveの作り方：
+;Kill-curveの作り方
 :バイナリベクターを含まないAgrobacteriumを用いて形質転換と同じ操作を行い、3週間の選抜で100%の胚軸切片を殺す最小の抗生物質濃度を決める。Stougaardによればこの最小濃度の2倍を用いる。しかし、Stillerらはこの最小濃度を用いている。我々の経験では、カルス培地でのselectionは最小濃度の4-6培とやや高い濃度で行い、再分化培地ではselectionを行わないのがよい。この場合いくらかescapeが出ることは避けられないが、全体としてよい結果が得られる。目安となる濃度は、Hygromycinが40μg/ml、G418では25μg/ml。