PlantBiotech:Species/Lotus japonicus - Revision history

Editor at 06:19, 2 September 2011

2011-09-02T06:19:34Z

Editor at 07:04, 1 September 2011

2011-09-01T07:04:04Z

Adm at 01:39, 27 August 2011

2011-08-27T01:39:56Z

Adm at 01:26, 27 August 2011

2011-08-27T01:26:37Z

Adm: /* 試薬・培地の調整 */

2011-08-27T01:16:33Z

‎試薬・培地の調整

Adm: moved PlantBiotech:Lotus japonicus to PlantBiotech:Species/Lotus japonicus

2011-07-22T01:34:52Z

moved PlantBiotech:Lotus japonicus to PlantBiotech:Species/Lotus japonicus

Adm: moved Doc:Horticulture/Lotus japonicus to PlantBiotech:Lotus japonicus

2011-07-22T01:34:29Z

moved Doc:Horticulture/Lotus japonicus to PlantBiotech:Lotus japonicus

Editor: /* Root Elongation */

2011-07-08T05:49:40Z

‎Root Elongation

Editor: /* 種子の滅菌 */

2011-07-08T05:47:51Z

‎種子の滅菌

Editor at 05:46, 8 July 2011

2011-07-08T05:46:22Z

← Older revision		Revision as of 06:19, 2 September 2011
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	===解説===		===解説===
−	{{~~Horticulture~~/手法解説}}	+	{{PlantBiotech/手法解説}}

@@ Line 3: / Line 3: @@
 |__TOC__
 |}
 ==ミヤコグサ形質転換マニュアル==

@@ Line 1: / Line 1: @@
 {{PlantBiotech/Header}}
+{| style="float:right"
 ==ミヤコグサ形質転換マニュアル==

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Line 1:		Line 1:
		+	{{PlantBiotech/Header}}
		+
	==ミヤコグサ形質転換マニュアル==		==ミヤコグサ形質転換マニュアル==

@@ Line 22: / Line 22: @@
 <references/>
-==試薬・培地の調整==
+==試薬の調整==
-{{Horticulture/溶液の調製}}
+{{PlantBiotech:Species/Lotus japonicus/Reagent}}
-{{Horticulture/培地の調製}}
+==培地の調整==
 ==形質転換の操作==

@@ Line 81: / Line 81: @@
 ===Root Elongation===
-# <ref>直径約 6 cm 、高さ約 7 cｍ のプラスチック製プラントボックスの蓋に直径 5 mm 程度の穴をあけ、そこに通気用のテフロンシール (ミリポア) を貼る。やや小さいが通気用シールを貼ったものが市販されている (イワキ) 。）</ref>この円形プラントボックスにroot elongation培地 (約 40 ml) を入れ滅菌する。
+# 円形プラントボックスにroot elongation培地 (約 40 ml) を入れ滅菌する。<ref>直径約 6 cm 、高さ約 7 cｍ のプラスチック製プラントボックスの蓋に直径 5 mm 程度の穴をあけ、そこに通気用のテフロンシール (ミリポア) を貼る。やや小さいが通気用シールを貼ったものが市販されている (イワキ) 。）</ref>
 # 植物を浅く突き刺す。
 # 3-4 週間、 26 ℃ (明、16 hrs)、 23 ℃ (暗、8 hrs) のグロースキャビネットで培養 (培地交換の必要はない) 。

@@ Line 35: / Line 35: @@
 # '''Lotus japonicus (Gifu) 種子''' 40 粒ずつを小型の磁製乳鉢に入れ、#400のサンドペーパーで擦って表面に傷を付ける<ref>少ない数の種子で丁寧に行うことが大事。慣れればほぼ100%の種子が発芽する。種子滅菌法については、「ミヤコグサの基本実験系マニュアル」をあわせ参照のこと。</ref>。または、種子を 2-3 ml  の濃硫酸に漬け、 20 分間静置する<ref>プラスチック棒などでよく攪拌し気泡をのぞくとともに、固まっている種子をほぐす。 20 分後、硫酸をピペットで除き、大量の滅菌水で5回程度リンスしてから次のステップに移る。</ref>。
-#市販の次亜塩素酸ソーダの1/2希釈液に 0.02% Tween20 を加え、種子をこの中に漬けて 10分 (硫酸処理後の場合は 20 分) インキュベートする。この間シーソーしんとう器などを用いて穏やかに攪拌する<ref>Falcon2070チューブなどを使い、 400-600 粒の種子に対して 25 ml 位を用いる。次亜塩素酸ソーダは古くなると有効塩素濃度が下がるので注意が必要。冷蔵庫に保存しあまり古くなったものは使わないか、濃度を濃くすることがよい。十分な滅菌が出来ない場合には、次亜塩素酸ソーダの前に 95 % エタノールで 30 秒程度処理すると改善される場合がある。</ref>。
+#市販の次亜塩素酸ソーダの 1/2 希釈液に 0.02 % Tween20 を加え、種子をこの中に漬けて 10分 (硫酸処理後の場合は 20 分) インキュベートする。この間シーソーしんとう器などを用いて穏やかに攪拌する<ref>Falcon2070チューブなどを使い、 400-600 粒の種子に対して 25 ml 位を用いる。次亜塩素酸ソーダは古くなると有効塩素濃度が下がるので注意が必要。冷蔵庫に保存しあまり古くなったものは使わないか、濃度を濃くすることがよい。十分な滅菌が出来ない場合には、次亜塩素酸ソーダの前に 95 % エタノールで 30 秒程度処理すると改善される場合がある。</ref>。
 #滅菌水で 10 分ｘ 3 回洗う。
 #滅菌水で 20 分ｘ 3 回洗う<ref>20分の洗浄後、水が黄色くならなくなるまで繰り返せばよい。</ref>。

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−	モデル植物としてのミヤコグサ[[Species:Lotus\|''Lotus japonicus'' ]]は、マメ科植物における数少ないstableな形質転換系を提供するものです。Agrobacteriumを用いた基本的な形質転換法は1992年デンマークAarhus大学のグループによって確立されましたが<ref>Handberg, K. and Stougaard, J. (1992) Plant Jour.; 2(4): 487-496</ref>、その後、当時この研究室のメンバーであったJiri Stillerらによって改訂されたプロトコルが提案され<ref>Jiri Stiller et al. (1997) Jour. Exp. Bot.; 48(312): 1357-1365</ref>、またAarhusのグループも改訂された方法を発表しており<ref>Thykjaer, T. et al. (1998) In AgCell Biology: A laboratory handbook, 2nd Ed.Ah: 518-525, Academic Press</ref>、現在多くの研究室がこれらのプロトコルによって実験を行っています。	+	モデル植物としてのミヤコグサ[[Species:Lotus\|''Lotus japonicus'' ]]は、マメ科植物における数少ないstableな形質転換系を提供するものです。Agrobacteriumを用いた基本的な形質転換法は 1992 年デンマークAarhus大学のグループによって確立されましたが<ref>Handberg, K. and Stougaard, J. (1992) Plant Jour.; 2(4): 487-496</ref>、その後、当時この研究室のメンバーであったJiri Stillerらによって改訂されたプロトコルが提案され<ref>Jiri Stiller et al. (1997) Jour. Exp. Bot.; 48(312): 1357-1365</ref>、またAarhusのグループも改訂された方法を発表しており<ref>Thykjaer, T. et al. (1998) In AgCell Biology: A laboratory handbook, 2nd Ed.Ah: 518-525, Academic Press</ref>、現在多くの研究室がこれらのプロトコルによって実験を行っています。

	以下のミヤコグサ形質転換マニュアルは、Aarhus大学の研究室の最近のプロトコルと、その後のJiri Stillerらによる改訂プロトコルをもとにし、それぞれのグループから入手したいくつかの最近のノウハウを付け加えて、現在私たちの研究室で行っている方法を整理したものです。大筋はJiri Stillerらによる改良法に準拠しています。		以下のミヤコグサ形質転換マニュアルは、Aarhus大学の研究室の最近のプロトコルと、その後のJiri Stillerらによる改訂プロトコルをもとにし、それぞれのグループから入手したいくつかの最近のノウハウを付け加えて、現在私たちの研究室で行っている方法を整理したものです。大筋はJiri Stillerらによる改良法に準拠しています。